紫外分光光度法測定維生素A的含量

1．原理

維生素A的異丙醇溶液在325 nm波長下有zui大吸收峰，其吸光度與維生素A的含量成正比。

本法的靈敏度較比色法高，可測定維生素A含量低于5μg／g的樣品。主要缺點是在維生素Azui大吸收波長325 nm附近許多其他化合物也有吸收，干擾測定，故本法適用于透明魚油，維生素A的濃縮物等純度較高的樣品。對于一般樣品，測定前必須先將脂肪抽提出來進(jìn)行皂化，萃取其不皂化部分，再經(jīng)柱層析除去干擾物。

2．儀器

3．試劑

①異丙醇。

②維生素A標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取1 g相當(dāng)于50 000單位維生素A的濃魚肝油0．1000 g，加異丙醇溶解，定容至125 mL。此溶液1 mL相當(dāng)于40單位(即40 IU．mL-1)。

4.測定步驟

①標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別取維生素A標(biāo)準(zhǔn)溶液(40 IU·mL-1)O．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、4·0 mL，于10 mL棕色容量瓶中，用異丙醇定容。以空白液調(diào)儀器零點，于紫外分光光度計上在325 nm波長下分別測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

②樣品測定：稱取適量樣品，按照三氯化銻比色法進(jìn)行皂化、提取、洗滌、濃縮、蒸發(fā)醚層后，迅速用異丙醇溶解并移人50 mL容量瓶中，用異丙醇定容，于紫外分光光度計325nm處測定其吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相當(dāng)?shù)木S生素A含量。

5．計算

X=[(c*V)/m]*100

式中：X——樣品維生素A的含量，IU·(100 g) -1；

   c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的維生素A含量，IU·mL-1；    ．

   V——樣品的異丙醇溶液體積，mL；

   m——樣品質(zhì)量，g。